1. 主要科技创新（限5页） （1）拟建立辣蓼野生驯化生产基地的前期研究。 ①辣蓼的文献学研究。蓼子草又名水蓼,为蓼科蓼属植物。对近20年来蓼子草的研究现状,包括化学成分、质量分析、药理活性三个方面进行综述,以期为该药的资源开发和利用等提供参考。 ②辣蓼及其混淆品鉴别研究。目的：研究并建立黔产辣蓼Polygonum hydropiper药材指纹图谱。方法：采用HPLC法,Hypersil ODS2 C18柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为260 nm,柱温25℃,对22批不同产地辣蓼药材及其混淆品进行检测。结果：建立辣蓼药材HPLC指纹图谱共有模式,标定12个共有峰。并对15批不同产地辣蓼药材及其7批混淆品进行了相似度比较。15批辣蓼药材相似度均大于0.95,7批混淆品均小于0.50。结论：辣蓼药材HPLC指纹图谱具有重复性好、特征性强、方法简便等特点,可作为黔产辣蓼药材的识别方法。 （2）建立辣蓼野生驯化生产基地研究。
①对拟选辣蓼仿野生种植基地的环境适合性评价研究。目的:对遵义市湄潭县复兴镇中药材种植基地环境进行评价。方法:监测大气、土壤和农用灌溉水。结果:该基地大气各污染指数均达清洁水平;2个土壤监测点的单项污染指数均小于1,综合污染指数在0.36~0.65之间,属清洁水平;农用灌溉水质单项污染指数均小于0.5,综合评价指数在0.06~0.28之间,属于清洁水平。结论:复兴镇中药材种植基地的土壤、灌溉水、大气环境质量良好,符合《绿色食品产地环境技术条件》NY/T391-2000规定的基地环境质量标准,可以满足无公害中药材的生产要求。 ②基地产辣蓼种子质量研究。目的:建立苗药辣蓼及其易混品丛枝蓼的种子质量检验方法及分级标准。方法:将辣蓼及丛枝蓼种子分别进行扦样、净度、真实性、千粒重、含水量、发芽率及生活力测定。结果:辣蓼及丛枝蓼种子外观形态差异明显,容易鉴别;辣蓼种子送验及试验最少质量为20 kg、2 g,净度为67.43%,用五百粒法测定重量;种子经0.2%硝酸钾溶液浸泡1 h后置种于具2层纱布的培养皿中,在(30±2)℃、光照(4 500±500)Lx条件下发芽率为65.3%;BTB法和电导率法测定的生活力分别为100%、(0.02±0.00)mv;丛枝蓼种子送验及试验最少质量为25 kg、2.5 g,净度为72.52%,用五百粒法测定重量;种子经0.2%硝酸钾溶液浸泡4 h后置种于具细沙的发芽盒中,在(30±2)℃、光照(4 500±500)Lx条件下发芽率为55.8%;BTB法和电导率法测定的生活力分别为20%、(0.10±0.03)mv。以辣蓼及丛枝蓼种子的发芽率、五百粒重、水分、净度和生活力5个指标作为制定分级标准可分一级优良品,二极合格品,三级不合格品。结论:本实验制定的种子质量分级标准符合要求、切实可行,可作为辣蓼生产过程中种子的质量控制依据。 ③基地产辣蓼种植技术研究。董酒生产中使用的辣蓼,资源渐渐减少,用量渐渐增加,供需矛盾凸显,需要人工种植以满足需要;为了编制规范人工种植的技术规程成,需要摸索关键技术参数。本文就实际种植生产董酒用辣蓼过程中所总结的关键技术参数报道。 ④基地产辣蓼的储藏、运输研究。目的:研究生产董酒用辣蓼贮藏条件与运输注意事项,为获得优质的原料提供条件保障。方法:以中药材贮藏及运输相关法规作为参考或指导依据,摸索适宜的贮藏条件及运输操作规范。结果:探索出了适宜贮藏辣蓼条件,以及运输中的注意事项。结论:该贮藏条件及包装材料简便、科学、规范,可为生产董酒用辣蓼药材原料的贮藏及运输提供参考。 ⑤基地产5月、8月、11月采收的辣蓼水提物成分研究。目的: 比较采收于 5 月、8 月及 11 月贵州产辣蓼水提物的成分差异。方法: 以辣蓼水提物收率为指标，以料液比( A) 、提取时间( B) 和提取次数( C) 为考察因素进行正交试验，计算不同考察因素下辣蓼水提物的收率，并比较 K 值和极差( R) 值，以确定辣蓼水提物的提取工艺条件; 采用气相色谱质谱联用仪( GC-MS) 检测采集于 5、8、11 月的贵州辣蓼水提物的化学成分的异同。结果: 最佳提取工艺为料液比( 1∶12) 、提取时间 100 min、提取次数 3 次，采集于 3 个不同月份的辣蓼中共鉴定出 115 种化学成分，主要含有酯类、烷类、酮类、酸类、萜类和醛类等化合物; 采集于 5 月份的辣蓼中检测出 47 种化学成分，其中含量较高的有七氟丁酸二十六烷基酯( 27．48% ) 、三十四烷( 16．28% ) 、二十八烷基戊基醚( 11．78% ) 和棕榈酸( 4．74% ) ; 采集于 8 月份的辣蓼中检测出 53 种化学成分，其中含量较高的有 3，3'，4，4' － 四甲氧基二苯乙烯( 11．84% ) 、( S) － 2，3 － 二氢 － 5 － 羟基 － 7－ 甲氧基 － 2 － 苯基 － 4H － 1 － 苯并吡喃 － 4 － 酮( 9．55% ) 、三十四烷( 7．70% ) 和三氟乙酸二十八烷基酯( 7．50% ) ; 采集于 11 月份的辣蓼中检测出 56 种化学成分，其中含量较高的有( E) － 4 － ( 3 － 羟基丙 － 1 － 烯 － 1－ 基) － 2 － 甲氧基苯酚( 9． 32% ) 、2，3 － 二氢 － 苯并呋喃( 7．31% ) 、反式对香豆酸( 7．22% ) 和 3，3'，4，4' － 四甲氧基二苯乙烯( 6．94% ) ; 3 个月份采集的辣蓼中共有的化学成分 11 种。结论: 不同季节采集的辣蓼水提物中的化学成分具有明显的差异，硬脂酸和棕榈酸可作为辣蓼脂肪酸类的指纹图谱成分。 ⑥采收于5月、8月和11月基地辣蓼地上部分的挥发油的成分研究。目的:比较采收于5月、8月和11月贵州产辣蓼地上部分的挥发油的成分。方法:通过水蒸气蒸馏法提取辣蓼地上部分中的挥发性成分,并采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析5月、8月和11月辣蓼的挥发性成分异同。结果:从3个月份采收的辣蓼地上部分的挥发油中共鉴定出125种化学成分,5月份辣蓼挥发油中检测出61种化学成分,其中含量较多的为酯类(19.58%)、酮类(15.56%)和醇类(14.65%);8月份辣蓼挥发油中检测出64种化学成分,其中相对含量较多的为萜类(26.99%)、醇类(23.14%)和酮类(14.33%);11月辣蓼挥发油中检测出62种化学成分,其中含量较多的有萜类(36.31%)、酮类(26.09%)和醇类(16.14%);3个月份共有的挥发性成分15种。结论:不同月份辣蓼油的化学成分差异较大,其中共有的15种挥发性成分构成辣蓼共性指纹图谱,可以推荐作为鉴别辣蓼的与别的物质的依据;不同月份辣蓼油的差异成分是鉴别不同时间段采收辣蓼的依据,也是可以推荐作为根据不同目的选择应用辣蓼的依据。 ⑦基地产辣蓼高效液相色谱法测定并比较辣蓼不同部位（根、茎、叶、花和种子）的槲皮素含量,并建立辣蓼HPLC指纹图谱研究。建立了高效液相色谱法测定并比较辣蓼不同部位（根、茎、叶、花和种子）的槲皮素含量,并建立辣蓼HPLC指纹图谱。采用Hypersil ODS2 C18色谱柱,以乙腈∶0.2%磷酸（20∶80）为流动相,检测波长360 nm。结果显示,辣蓼药材不同部位槲皮素的含量差异较大,槲皮素含量最高的是叶,其次是茎、花和种子,根中含量较低。辣蓼不同部位与药材HPLC指纹图谱相似度差异较大,药材间的相似度均大于0.95,不同部位间相似度均小于0.60。 ⑧基地产辣蓼的显微鉴别要点及金属元素含量研究。目的通过显微鉴别的方法对黔产辣蓼的根、茎、叶等显微特征进行对比研究,测定其金属元素的含量,为其质量控制及开发利用提供实验依据。方法采用常规的显微技术分别观察辣蓼的根、茎、叶的组织结构,同时采用电感耦合发射光谱法(ICP-OES)测定辣蓼中22种金属元素含量。结果鉴定了黔产辣蓼的显微特征,黔产辣蓼叶表面可见腺毛与非腺毛,气孔多为平轴式,偶见不等式或不定式,副保卫细胞常为2～4个。根横切面可见维管束为有限外韧型;茎横切面中柱鞘纤维束断续排列成环,韧皮部狭窄,髓部薄壁细胞内含草酸钙簇晶。检测出辣蓼中含有丰富的Ca、Mg、Al、K、Fe、Mn、Ag、Zn等元素,精密度RSD为0.244%～2.681%,辣蓼中的Pb、As、Cu、Hg、Cd等有害重金属元素含量均未超标,符合2015年版中国药典的质控标准。结论黔产辣蓼中有害重金属含量均符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》要求,本实验从显微鉴定及重金属元素的测定方面为黔产辣蓼的药用安全性评价提供实验依据,同时也为辣蓼的综合开发利用提供理论基础。 ⑨建立基地产辣蓼的薄层鉴别与含量测定方法研究。为建立黔产辣蓼的薄层鉴别与含量测定方法,采用薄层色谱法,以槲皮素为对照,以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10∶8∶1)为展开剂,建立了其定性鉴别方法;采用高效液相色谱法,以槲皮素为对照,Hypersil ODS2C18(5μm,200mm×4.6mm)为色谱柱,0.20%磷酸溶液-乙腈(80∶20)作为流动相,二极管矩阵检测器为检测器,建立了其含量测定方法。结果表明:建立的TLC法能很好分离各成分,其方法学考察精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD分别为0.18%、0.71%、1.10%和2.44%,能够准确测定辣蓼中槲皮素的含量。 ⑩建立基地产辣蓼药材的定性、定量检测方法研究。目的：建立黔产辣蓼药材的定性、定量检测方法,并制定质量标准。方法：对黔产辣蓼药材进行性状鉴别、显微鉴别,采用薄层色谱(TLC)法对其中的槲皮素进行定性鉴别,采用高效液相色谱(HPLC)法对其中的槲皮苷进行含量测定。按照《中华人民共和国药典》2015版(一部)附录方法对辣蓼药材中的水分、总灰分、酸不溶性成分、浸出物进行测定。结果：薄层色谱斑点清晰,无干扰,专属性强;含量测定槲皮苷在0.462~4.158μg范围内线性关系良好,Y=79.004X+0.520,r=0.999 8,平均回收率为98.00%;初步拟定水分不得超过14.0%,总灰分不得超过14.0%,酸不溶性成分不得超过5.0%,浸出物不得超过10.0%。结论：本方法操作简单,结果可靠,可有效控制辣蓼药材的质量。 （3）辣蓼产品进一步开发研究。 本研究目的是优化辣蓼提取物清除DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯）的反应体系,研究栽培辣蓼提取物的抗氧化能力,更好地利用栽培辣蓼资源。本研究首先优化DPPH工作及保存参数,筛选辣蓼提取物清除DPPH体系;进而测定辣蓼提取物DPPH清除率。结果显示DPPH溶液应用无水乙醇现用现配,4℃保存,工作浓度应在36.3121μmol/L之间;辣蓼提取物清除DPPH的反应时间为30 min,室温（27℃）避光。辣蓼提取物的IC50为334 mg/L。优化DPPH清除反应体系后,测定的辣蓼提取物清除DPPH活性准确可信,可更好的评价栽培辣蓼提取物的抗氧化能力。 |
|
